抗體種類繁多,品牌眾 多,技術(shù)參數(shù)不一,價格和質(zhì)量更是相差甚大,如何購買到高質(zhì)量價格合適的抗體,并準(zhǔn)確地做出我們想要的結(jié)果,其中有很多細節(jié)需要注意。
一、怎樣選擇適合你實驗需要的抗體?
1. 一抗選擇要點
(1)確定抗體的名字,注意中英文名字、它名、亞型等信息。
(2)確定你的實驗類型,Elisa,WB,IHC,ICC,還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型,如果抗體說明 書沒有提及的應(yīng)用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證,請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的 抗體。
(3)確定實驗樣本的種屬,Human,Mouse,還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗,請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。
(4)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體,待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構(gòu)象的改變,會影響抗體的免疫親和反應(yīng)。
(5)單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。
2. 二抗選擇要點
(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
二、抗體的穩(wěn)定性
1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結(jié)果。抗體是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一,其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結(jié)果。在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。
2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下,甚至短時間溫度達到50-60℃,抗體分子都能維持正確折疊,保持應(yīng)有的活性。
3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術(shù),確??贵w產(chǎn)品的高純度,保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失,高濃度的抗體穩(wěn)定性更好,抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。
三、怎樣確定抗體購買渠道和品牌?
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