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胞養(yǎng)好了，但是沒時間做后面的實驗了，這時怎么辦？將細(xì)胞收下來，直接凍在-80℃冰箱，是大多數(shù)人的常規(guī)操作。因為-80℃冰箱是大多數(shù)蛋白研究人員的安全感來源，但是把細(xì)胞凍存就保險了嗎？在凍存過程中，細(xì)胞發(fā)生了哪些變化呢？凍存過的細(xì)胞還可以提總蛋白嗎？可以做磷酸化研究嗎？可以分離胞質(zhì)胞核嗎？可以分離細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)嗎？
 凍存過程中，細(xì)胞發(fā)生了哪些變化？ 0℃至-60℃

細(xì)胞被凍存在-80℃冰箱后，隨著溫度的下降，在0℃到-60℃之間會形成大量冰晶，胞外的冰晶會導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生機(jī)械損傷，胞內(nèi)的冰晶則會破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞器，引起細(xì)胞死亡。細(xì)胞器被破壞，細(xì)胞器內(nèi)的蛋白酶釋放從而引起蛋白降解。

細(xì)胞凍融過程損傷機(jī)制

10℃至-16℃

當(dāng)溫度從10℃降溫至-16℃的過程中，細(xì)胞處于過冷狀態(tài)，冰晶自發(fā)形成，膜脂脫水從液相變?yōu)楣滔啵B透率改變，造成冷休克。冰晶損傷和冷休克都會對細(xì)胞成為致命殺手。復(fù)溫過程中，胞內(nèi)外冰晶容易發(fā)生再結(jié)晶形成更大的冰晶，高濃度的電解質(zhì)也會導(dǎo)致溶質(zhì)損傷，造成致命細(xì)胞傷害。復(fù)溫時造成的細(xì)胞損傷非常快，往往在極短的時間內(nèi)發(fā)生。

0℃至-196℃再至0℃

Nature子刊刊登的細(xì)胞樣品從0℃到-196℃再到0℃，細(xì)胞變化過程。可見細(xì)胞在冷凍和解凍過程中，溫度變化對細(xì)胞施加巨大壓力，由此可能導(dǎo)致蛋白變性并影響高級結(jié)構(gòu)，例如卵母細(xì)胞經(jīng)過凍存后，微管和減數(shù)分裂紡錘體的結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化，致使受精后染色體分離出現(xiàn)異常。

凍存的細(xì)胞樣品還能用嗎？還能提取蛋白做實驗嗎？ 總蛋白提取能做嗎？ 

凍存的細(xì)胞可以用于總蛋白提取，但是某些蛋白可能在凍融過程中已經(jīng)降解或高級結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，最終影響下游實驗的檢測。故做細(xì)胞凋亡檢測或磷酸化蛋白檢測，酶活性檢測等實驗，不建議使用凍存的細(xì)胞樣品。推薦細(xì)胞收集后盡快進(jìn)行蛋白提取，將蛋白樣品凍存于-80℃。Invent柱式法蛋白提取工具（Cat#SD-001/SN-002），讓來不及做蛋白提取成為歷史，僅需在細(xì)胞樣品中加入裂解液，過柱，1分鐘即可完成變性蛋白提取。迅速完成蛋白提取，再不用為細(xì)胞凍存問題而煩惱